Salė Šventojo Rudo rūmuose. Jis sako, kad mieste kilo riaušių. Kažkas nepažįstamo minios gale - mamytės, kaukės, šokėjai su varpeliais, žmonės juodais gaubtais - grasino, numatė ir ragino žmones nepaklusti karalienei. Karalienės Riccio kiemas patvirtina, kad jis taip pat retkarčiais stebi, kaip žmonės nekantriai klausosi šių pamokslų. Puslapyje toliau pasakojama, kad žmonės įsiveržė į karalienės koplyčią ir šaukė: „Papistų lizdas!“, Kad karalienės vyro Darnley bufetas pašoko prie altoriaus ir pradėjo apsimesti pamokslu, o žmonės atsakė jam tyčiodamiesi iš kupiūrų. Karalienė Marija Stuart neviltyje. Ji jaučia žmonių neapykantą, dauguma teisiamųjų ją paliko; ji stebisi, kaip jos krikščionybė gali taip skirtis nuo Škotijos žmonių krikščionybės. Riccio siūlo nedelsiant parengti dekretą, kuriuo būtų nubausti atsakingi už riaušes asmenys. Marija diktuoja savo puslapį, puslapyje paaiškinama, ar įrašyti karalienės vyro Heinricho Darnley vardą. Marija dvejoja; ji įtaria, kad riaušės jį paskatino - juk minią vedė karaliaus bufetas. Čia Riccio jai primena, kad ji yra karalienė; ji yra kaip saulė ir turi teisę bausti iš Dievo. Jis reikalauja nedelsiant paskambinti budinčiam pareigūnui, kad paskelbtų karalienės dekretą. Douglasas įeina. Marija liepia nuvežti popierių karališkajam kancleriui Mortonui, kad šis antspauduotų. Douglasas nuskaito dekretą ir mato, kad jis neturi karaliaus vardo. Jis klausia karalienės apie tai. Riccio yra atsakingas už ją. Douglasas praranda nuotaiką. Jis ragina karalienę nenaudoti kruvinų slopinimo priemonių, užsimena, kad tai mato kaip Prancūzijos ar Italijos įtaką. Tačiau karalienė šaltai primena jam apie savo galią pašalinti subjektus, nepaklususius jos valiai. Tarp Riccio ir Douglas prasideda kivirčas, Douglas meta Riccio į dvikovą ir prisiekia, kad rytoj nužudys venecijietį. Karalienė išeina ir pasiima Riccio. Douglasas liko vienas, jis svarsto dvikovą. Mortonas įeina. Douglasas rodo jam dekretą. Mortonas yra neryžtingas: jis bijo tiek karaliaus, tiek karalienės rūstybės. Be antspaudo, Mortonas pasiūlo karaliui. Tuo metu Henris užmezgė pokalbį su savo juderiu Nicku, kuris jį erzina, kad karalienė Škotijoje turi realią valdžią, o Henrikas yra tik jos vyras, kad karalienė pasirenka artimus, pavyzdžiui, šį italų arfistą Riccio ... Šiuo metu Mortonas atneša nelaimingą potvarkį. Karalius iš pykčio nusprendžia nužudyti Riccio. Karalius Lindsay patenka į teismą, jis kviečia karalių medžioti su naujai įsigytu falštu. Mortonas atsako, kad karalius šiandien jau turi okupaciją. Lindsay noriai prisijungia prie sąmokslo prieš Riccio. Jis pažodžiui draudžia nužudyti Riccio šį vakarą, nes jis turi jį nužudyti rytoj ryte. Tuomet Henris, pasinaudojęs delsimu, siunčia juokdarį astrologui išsiaiškinti, kokia žvaigždžių vieta yra jo ketinimams.
Astrologas savo laboratorijoje (jis taip pat yra alchemikas) tvirtina su savimi, kad patirtis patvirtina mokslo beprasmiškumą, tuo tikslu žvaigždžių valia dominuoja žmoguje, disponuoja gėriu ir blogiu. Nikas užeina, pabarsto sąmokslais, astrologas nėra prastesnis už jį. Nikas praneša, kad karalius pasiuntė jį paklausti apie Riccio likimą, ir liepia astrologui numatyti Riccio mirtį. Astrologas atsako, kad žvaigždės pasakys jam, o ne žmonėms, ir savo ruožtu prognozuoja juokdario mirtį. Su tuo jis išeina. Atsiranda astrologo sukeltas karalienės puslapis. Puslapis myli savo meilužę. Astrologas liepia pasakyti karalienei, kad šiandien vyras, kurį ji myli, mirs. „Kaip šiandien Botvelas mirs?“ - šaukia puslapis. Astrologas suglumęs. Jis turėjo omenyje Riccio ir skuba puslapį įspėti apie tai. Palikęs vien astrologas stebisi - iš žvaigždžių taip pat paaiškėjo, kad Botvelas kažkaip tamsiai susijęs su karaliene - per Marsą, Saturną ... Botvelas patenka. Iš jo monologo tampa aišku, kad netikėtai jis atsidūrė astrologo namuose. Suvokdamas, kur jis pateko, Botvelas klausia astrologo, kiek jam liko gyventi. Senukas atsako, kad treji metai ir kad Botvelas bus karalius. Botvelis išima buteliuką nuodų, su kuriuo norėjo nusižudyti, nori jį išmesti - ir dvejoja. Iš tiesų, rūmų intrigų atmosferoje bet koks ginklas pravers. Jis išeina.
Puslapis praneša karalienei, kad Riccio netrukus ateis. Karalienė jo labai laukia - jos manymu, jis vienas liko jai ištikimas. - O Botvelas? Puslapis klausia. „Kas yra„ Botvel “?“ - sudomino karalienė. Nustebęs puslapis pasakoja apie Mariją, kaip, plaukdamas stipriu vėjeliu, nuplėšė rožę nuo karalienės galvos, į vandenį nukrito gėlė. Ir tada vienas iš kiemų - Botvelas - nuskubėjo į valtį ir išsigandęs nusekė irkluotoją, kad sugautų rožę iš vandens. Išgirdusi istoriją, Marija atsiunčia puslapį melstis. Ji prisipažįsta Dievui, kad neturi daugiau jėgų atsispirti savo meilei Botveliui. Karalienė žino, kad teisme ji laikoma įsimylėjusia Riccio. Riccio įeina. Marija praneša apie mirtiną pavojų, keliantį grėsmę, ir šaltai atsisveikina, nukreipdama jį į laivą, kuris nuveš į Romą. Nusivylęs Riccio bando paprašyti karalienės atšaukti sprendimą išvykti. Karalienė yra nepriekaištinga.
Heinrichas, Mortonas ir Lindsay sužinojo apie artėjantį Riccio išvykimą ir paskubomis įsipareigojo jį nužudyti arba leisti plaukti. Tada pasirodo Douglasas ir praneša, kad Riccio jau plaukė. Douglasas iš nevilties trokšta kruvino keršto, jo riterio garbė yra sužeista. Staiga jie susitinka puslapyje, kuriame karalienė atneša Riccio raštelį - jis neišėjo ir vakare bus su ja. Sąmokslininkai atima užrašą.
Marija užsiėmusi siuvinėti savo kambaryje. Atėjęs Riccio jai paaiškina, kad negalėjo išvykti, nes ryte turi dvikovą su Douglasu. Jis prisipažįsta, kad jam nereikia gyvenimo be jos meilės. Jis prašo Marijos suteikti jam rožių vainiką - jis Romoje pasodins gėlių ant altoriaus ... Henris, Douglasas ir Dindsay įeina ir užmuša Riccio. Karalienė nualpsta. Douglasą užklupo gėda ir siaubas - jis savanoriškai pasitraukia į tremtį. Henris nerimauja, ar karalienė jo nekentys. Lindsay nuneša karalių, šnabždamasi jam apie artėjančią medžioklę. Karalienę kviečia karalienė Botwell. Marija prisipažįsta, pamato Botvelį ir išpažįsta jam savo meilę. „Botwell“ priverčia ją pripažinti, kad ji nori Henrio mirties, ir atiduoda jai savo butelį nuodų, sakydama, kad tai yra miego tabletė. Marija duoda karaliui šį „vaistą“, tačiau nuodai geria bufetą. Tačiau niekas negali sustabdyti žmogžudystės intrigos - Botvelas susprogdina karaliaus Henriko namus. Tolumoje girdisi augantys minios klyksmai. Botelis su karaliene slepiasi.